Peter Parker n'est bien sûr pas un inconnu. Ce Spider-Man est celui que nous connaissons par les bandes dessinées et les films. Dans Spider-Man 2, Peter a un comportement un peu étrange. Son costume est plus sombre et il a des pouvoirs spéciaux que nous avons également vus dans Venom. C'est dû au symbiote, une matière noire, que Peter a choisi d'héberger. En conséquence, vous vainquez les ennemis avec de nouveaux pouvoirs tels que « Symbiote Spike Ball » et « Symbiote Grand Slam ».

Miles Morales est le deuxième Spider-Man de ce jeu. Vous pouvez facilement passer d'un Spider-Man à l'autre et incarner les deux. Nous connaissons Miles Morales grâce au film Into The Spider-Verse et au jeu Miles Morales. Lui aussi possède de nouveaux pouvoirs que vous pouvez utiliser lors des combats. Ses pouvoirs électriques sont devenus encore plus puissants, ce qui lui a permis d'apprendre de nouvelles attaques telles que « Electric Teleport » et « Thunderbust ». Vous ne pouvez utiliser ces pouvoirs que lorsque vous incarnez Miles.